Le laboratoire du Dr. Bouvier (Département de Biochimie, Université de Montréal) a généré au cours des dernières années de nombreuses lignées cellulaires exprimant de façon hétérologue des récepteurs bêta-adrénergique de type sauvage, mutant et hybride ( 1, 2 et 3) certains récepteurs alpha-adrénergique ( 1B et 2) et un récepteur de la vasopressine (V2). Ces lignées cellulaires sont mises à la disposition de la communauté scientifique par l'entremise du RETEB. Pour les obtenir, il suffit de contacter Dre Monique Lagacé à l'adresse électronique suivante: monique.lagace@umontreal.ca
Chaque lignée cellulaire est caractérisée par l'ADN (plasmide contenant la séquence codant pour le récepteur) ainsi que par la souche cellulaire (HEK 293, Ltk-, CHW et HeLa) utilisée pour la transfection.
Il y a deux banques de lignées cellulaires :
- ADN du Dr Bouvier
Celle dont les lignées cellulaires ont été transfectées par les membres du laboratoire Bouvier avec de l'ADN généré dans le même laboratoire
- Autres ADN
Celle dont les lignées cellulaires ont été obtenues de collaborateurs (l'ADN de ces lignées n'est pas disponible dans le laboratoire du Dr. Bouvier).
Pour trouver les lignées cellulaires qui vous intéressent, vous pourrez utiliser l'une des deux options suivantes:
1. Afficher la liste complète des lignées cellulaires provenant des deux banques mentionnées ci-dessus en sélectionnant le lien correspondant:
*Le premier choix (ADN du Dr. Bouvier) vous donnera une liste contenant un numéro d'ADN (DNA No), la description de la construction (Summary of construct) ainsi qu'une liste de types cellulaires (cell lines created with that DNA). NB : si le même type cellulaire est répété plusieurs fois, il s'agit de différents clones de la même lignée cellulaire exprimant des quantités différentes de récepteurs (eg. 1pmole, 0.5pmole, etc.). Pour connaître le niveau d'expression, il vous faudra communiquer avec Dre Monique Lagacé qui pourra vous donner l'information. Il est à noter que le niveau d'expression peut changer après congélation/décongélation des lignées cellulaires.
*Le deuxieme choix (Autres ADN) vous donnera une liste contenant un numéro d'identification des cellules (Cell ID), le type cellulaire (Cell type) ainsi que la description de la construction d'ADN (Summary of construct). Ici, seulement une lignée cellulaire est présente puisqu'elle a été obtenue d'un collaborateur externe.
2. Utiliser l'outil interactif (recherche):
Ceci vous permettra de trouver une lignée cellulaire en fonction des caractéristiques du plasmide, du récepteur et/ou de l'épitope de l'ADN avec lequel elle a été transfectée. Le formulaire contient plusieurs menus déroulants contenant les choix suivants:
- Plasmide:
- Épitope N-terminal:
- Épitope C-terminal:
- Espèce:
- Symbole:
- Suffixe:
- Protéine:
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plasmide d'expression utilisé pour la construction
(eg. pcDNA3, pBC12BI, etc.)
épitope-étiquette placé au début de la séquence qui
code pour le récepteur (eg. cMyc, HA, etc.)
épitope-étiquette placé à la fin de la séquence qui code
pour le récepteur (eg. Flag)
espèce utilisée pour le clonage de l'ADN (humain)
type de récepteur: a et b représentent alpha () et
bêta (), respectivement. V représente vasopressine
représente le sous-type du récepteur (eg. 2 pour
le bêta-2-Adrénergique).
nom général de la protéine codée par l'ADN
transfecté (ie. Le récepteur)
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Il vous faudra aussi choisir la banque dans laquelle vous désirez faire votre recherche (au haut de l'écran). N.B. la banque sélectionnée par défaut est "ADN du Dr Bouvier"
Lorsque les choix appropriés sont terminés, il suffit de sélectionner le bouton: "Débuter la recherche" au bas de l'écran.
Le résultat de la recherche vous donnera une liste semblable à celle que vous auriez obtenue en affichant la liste complète de chaque banque, mais contiendra seulement les lignées cellulaires qui correspondent à votre recherche. Il vous suffit donc de noter le numéro d'identification de l'ADN (pour Bouvier's lab) ou le numéro d'identification de la lignée cellulaire (autre) et de le transmettre avec votre demande au laboratoire du Dr. Bouvier.
Si votre recherche vous retourne vers trop ou trop peu de lignées cellulaires, il vous faut simplement retourner en arrière pour resserrer ou élargir les choix dans les menus déroulants.
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